Сфера применения
Основные сферы применения ПЦР – медицинская диагностика инфекций, наследственных и онкологических заболеваний, судебно-медицинская экспертиза, установление отцовства и родства, научные исследования, пищевая промышленность и сельское хозяйство. Ключевое преимущество ПЦР перед многими другими методами: крайне высокая чувствительность и специфичность.
Нормативная база и этапы анализа
Методические указания МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности» определяют методы выполнения анализов, принципы организации лаборатории и перечень рекомендуемого оборудования.
Процесс происходит в несколько этапов: подготовка проб, амплификация (многократное увеличение числа копий фрагмента нуклеиновых кислот) и детекция.
Методы детекции продуктов амплификации нуклеиновых кислот:
-
• электрофоретический (в агарозном или полиакриламидном геле);
• гибридизационно-ферментный;
• гибридизационно-флуоресцентный (детекция продукта в режиме «реального времени» или регистрация продукта после окончания реакции амплификации).
Требования биобезопасности и зонирование
Исследование материала, содержащего (или подозрительного на содержание) микроорганизмы I - IV групп патогенности, связано с необходимостью одновременного обеспечения персоналом правил биологической безопасности. Это критически важно для предотвращения контаминации нуклеиновыми кислотами или ампликонами помещений и оборудования.
Лаборатория в соответствии с этапами проведения анализа должна включать следующий набор последовательно расположенных самостоятельных рабочих зон:
-
• Рабочая зона 1: приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала;
• Рабочая зона 2: выделения нуклеиновых кислот;
• Рабочая зона 3: проведения реакции амплификации и учета ее результатов при использовании гибридизационно-флуоресцентного метода детекции;
• Рабочая зона 4-1: учета результатов реакции амплификации нуклеиновых кислот методом электрофореза или гибридизационно-ферментным методом детекции;
• Рабочая зона 4-2: учета результатов детекции продуктов амплификации нуклеиновых кислот методом секвенирования или на ДНК-чипах.
Инженерное оснащение и вспомогательные помещения
Помещения лаборатории должны быть боксированными (боксы с предбоксами) и оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией, водопроводом, канализацией, электричеством и отоплением, средствами пожаротушения, естественным и искусственным освещением.
В состав лаборатории могут быть включены вспомогательные помещения:
-
• комнаты персонала и кабинет заведующего лабораторией;
• раздевалки для сотрудников;
• комната приема пищи и туалет;
• подсобные (складские) помещения, которые должны быть вынесены за пределы рабочей зоны.
Необходимо предусмотреть наличие автоклавной комнаты для обеззараживания исследуемого материала, которая может быть общей с другими подразделениями учреждения.
Оборудование рабочих зон
Рабочие зоны лаборатории ПЦР оборудуются холодильниками, боксами биологической безопасности II класса защиты, миницентрифугами, вортексами, твердотельными термостатами, амплификатором с системой детекции результатов в режиме «реального времени», флуоресцентным ПЦР-детектором и камерой для электрофореза. Для экстракции ДНК/РНК из биологического материала, как правило, применяются готовые автоматизированные системы или наборы реагентов.
Проектирование и комплексное оснащение ПЦР-лабораторий
Правильное зонирование и строгое соблюдение принципов биобезопасности – основа достоверности ПЦР-анализов и успешной аккредитации лаборатории. Организация боксированных помещений с предбоксами, грамотная поточность процессов и подбор сертифицированного оборудования в соответствии с МУ 1.3.2569-09 исключают риски контаминации, оптимизируют работу персонала и гарантируют точность результатов на всех этапах исследования.
Часто задаваемые вопросы о проектировании ПЦР-лабораторий
Процесс происходит в несколько этапов: подготовка проб, амплификация (многократное копирование фрагмента нуклеиновых кислот) и детекция (электрофоретическая, гибридизационно-ферментная или флуоресцентная в режиме реального времени).
Лаборатория должна включать последовательно расположенные зоны: 1) прием и первичная обработка материала; 2) выделение нуклеиновых кислот; 3) проведение реакции амплификации и флуоресцентная детекция; 4) учет результатов методом электрофореза, гибридизационно-ферментным методом или секвенированием.
Помещения должны быть боксированными (с предбоксами), оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией, водопроводом, канализацией и средствами пожаротушения. Вспомогательные помещения (раздевалки, комната приема пищи, склады) должны быть вынесены за пределы рабочей зоны.
Для консультации по проектированию рабочих зон, подбору амплификаторов, боксов биологической безопасности, ПЦР-детекторов и систем экстракции под ваши методики, а также расчёту итоговой стоимости оставьте заявку через форму на сайте или свяжитесь с нами любым удобным способом:
8 (800) 100-98-81
Бесплатный звонок по России
info@proflabspb.ru
Напишите нам в любое время
Наши специалисты разработают проект ПЦР-лаборатории с учётом всех требований к зонированию, вентиляции и изоляции потоков, подберут оптимальный комплект оборудования для каждой рабочей зоны и обеспечат пусконаладку, валидацию методик и техническое сопровождение по всей России.